znieczulenie zewnątrzoponowe w polsce

Zatem różnice w UL36 były nietypowe i ograniczone do genomu Merlin, który został wychwycony w pAL1031. Mutacje UL36 w pAL1053 naprawiano przez rekombinację, aby dopasować sekwencję Merlin (p3), generując w ten sposób pAL1111 (Figura 1). Tabela Różnice sekwencji między Merlinem (NC_006273) a genomem HCMV w pAL1053 Najbardziej znaczącą dodatkową różnicą między Merlinem (p3) i pAL1053 (a zatem i pAL1111) było przesunięcie ramki odczytu w RL13 w nt 11363 spowodowane przez pojedyncze wstawienie nt (Tabela 1; patrz także poniżej). Pozostałe różnice nie miały widocznego wpływu na potencjał kodowania białka. Synonimowa substytucja w genie UL32 została retrospektywnie przedstawiona jako reprezentująca pojedynczy polimorfizm nt w genomie Merlin (p3). Trzy zmiany zostały odnotowane w b / b. odwrócona sekwencja powtórzeń. Dwie z nich to substytucje, z których jedna występuje zarówno w b, jak i b. a drugi w b. sam. Drugą z nich była delecja 51 pz ze względu na naturalną zmienność długości w sekwencji powtórzeń tandemowych zarówno w b, jak i w p. B / b. sekwencja jest regionem genomu HCMV, który jest najbardziej podatny na zmiany w HCMV (18, 59) Mutacje w RL13. Aby zbadać pochodzenie mutacji przesunięcia ramki odczytu w regionie kodującym RL13 (nt 11189 <12070), ten locus zsekwencjonowano w 10 dodatkowych BAC z tego samego etapu co pAL1031. Niespodziewanie stwierdzono, że wszystkie zawierają mutacje niszczące i zidentyfikowano 4 różne klasy (klasy 1. 4) zmutowanego, z których każdy przewiduje ekspresję skróconego białka RL13 (Figura 2). W celu określenia, czy RL13 zmutowano w surowicy wirusa użytej do wytworzenia pAL1031, region kodujący amplifikowano przez PCR z Merlin (p5) i 15 klonów sekwencjonowano (Figura 2). Mutacje wykryte w pojedynczych klonach, z wyjątkiem przypadków, w których odpowiadały mutacjom w BAC, mogły powstać w wyniku błędu PCR i zostały wyłączone z analizy. Klony PCR zidentyfikowały mutacje, które odpowiadały 3 z 4 zmutowanych grup (grupy 1, 2 i 4) w BAC, plus 3 dodatkowe grupy (klasy 5. 7). Żaden z klonów BAC lub PCR nie dostarczył sekwencji reprezentującej region kodujący WT RL13. Figura 2 Zestawienie sekwencji aminokwasowych potencjalnie kodowanych przez zmutowane wersje RL13 w pAL1031 i 10 innych BAC z tego etapu i klony PCR z Merlin (p5). Cieniowanie wskazuje tożsamość sekwencji WT Merlin (NC_006273). Liczby w nawiasach wskazują liczbę klonów zawierających odpowiednią mutację. Mutacje Nt były następujące (numeracja w stosunku do sekwencji Merlin, NC_006273): mutant 1, C. T (nt 11573; przedwczesny kodon stop); mutant 2, G. T (nt 11534; przedwczesny kodon stop); mutant 3, C. T (nt 11531; przedwczesny kodon stop); mutant 4 (który obejmuje pAL1031), dodatkowy A (nt 11363, przesuwanie się ramki); mutant 5, G. C (nt 11563, WCH); mutant 6, delecja nt 11276 <11860; mutant 7, G. A (nt 11191, Mł, zmieniony kodon startowy, białko przedstawiono jako rozpoczynające się od następnego w ramce M). Stwierdzenie, że wszystkie genomy w Merlin (p5) i BACs pochodzące z Merlin w stadium pAL1031 zostały zmutowane w RL13, podniosły kwestię, na którym etapie powstały te mutacje. Oryginalna sekwencja Merlin została określona na podstawie klonów bakteriofagowych M13 pochodzących z Merlin (p3). Retrospektywna analiza bazy danych sekwencji wykazała, że chociaż konsensus RL13 był WT, wszystkie poszczególne klony M13 zmutowano w różnych różnych pozycjach (Tabela 2). Ponadto, analiza poszczególnych klonów PCR wytworzonych z Merlin (p3) była również zgodna z tym zapasem wirusa zawierającym mieszaninę mutantów RL13 (tabela 2). Tak więc, klony PCR 18/22 wykazywały substytucje, które były również wykrywane w klonach M13. Każdy z pozostałych 4/22 klonów PCR zawierał unikalne mutacje w RL13 (dane nie pokazane), chociaż nie można wykluczyć, że były one wynikiem błędów PCR. Tabela 2 Różnice sekwencji między RL13 w WT Merlin (NC_006273) a subpopulacjami Merlin (p3) reprezentowanymi w klonie bakteriofagowym M13 lub PCR Aby zbadać, czy mutanty wykryte w Merlin (p3 i p5) były obecne w próbce klinicznej lub czy pochodzą z Hodowle komórkowe, 10 klonów PCR RL13 wytworzono z oryginalnej próbki klinicznej, stosując te same startery i warunki, jakie zastosowano w przypadku Merlin (p5). [podobne: zespół aspergera test, zespół fallota, zapalenie przyzębia ]