psychoterapia bydgoszcz nfz

W związku z tym, RL13 powodował ograniczenie wzrostu w komórkach nabłonkowych, jak również fibroblastach. W przeciwieństwie do tego, wiadomo, że UL128L nadaje ograniczenie tylko w fibroblastach. Figura 6 Wzrost wirusów pochodzących z BAC w ARPE-19. (A) Wielkość płytek po 2, 3 lub 4 tygodniach PT, z komórkami nałożonymi w celu zapobiegania rozprzestrzenianiu się wirusa bez komórek. (B) Kinetyka infekcji po transfekcji BAC do ARPE-19 bez nakładki, mierzona analizą FACS eGFP. (C) Kinetyka zakaźnego uwalniania wirusa do pożywki hodowli w B, z słupkami błędu pokazującymi średnią. SD. Hodowle komórkowe transfekowane BAC znakowanymi eGFP monitorowano jednocześnie pod kątem liczby zainfekowanych komórek (Figura 6B) i ilości zakaźnego wirusa uwalnianego do supernatantu (Figura 6C). Brak wzrostu mutantów UL128 (RCMV1158 i RCMV1159) w ARPE-19 (dane nie przedstawione) był zgodny z wcześniejszymi obserwacjami, że UL128L jest niezbędny do tropizmu komórek nabłonka. Podobnie jak w przypadku HFFF, blaszki generowane przez wirusy, w których naprawiano UL128 (RCMV1160 i RCMV1161) były ostatecznie przerośnięte przez niezainfekowane komórki, a rozprzestrzenianie wirusa wymagało okresowego ponownego wysiewu monowarstwy. Zarówno RCMV1160, jak i RCMV1161 rosły znacznie wolniej w ARPE-19 niż HFFF i, w przeciwieństwie do HFFF, ARPE-19 nie osiągnęły całkowitej infekcji (Figura 6B), zamiast osiągać plateau i tworząc przewlekłą infekcję. Wirus, w którym zarówno UL128, jak i RL13 zostały naprawione (RCMV1161), wzrastał znacznie wolniej niż RCMV1160 i tworzył przewlekłą infekcję, w której infekowano znacznie mniejszy odsetek komórek (około 15% dla RCMV1161 w porównaniu z 35% dla RCMV1160). RCMV1161 również wytwarzał niższe poziomy wirusa wolnego od komórek niż RCMV1160 (Figura 6C). Efekt ten był tylko częściowo przypisany niższej liczbie zainfekowanych komórek, ponieważ RCMV1161 zainfekował około połowę liczby komórek, podobnie jak RCMV1160, a jednak wytworzył ponad 10-krotnie mniej wirusa pozbawionego komórek. Porównywalne wyniki uzyskano przy użyciu wirusów pozbawionych markera eGFP. Tak więc, naprawa RL13 powoduje wolniejsze rozprzestrzenianie się komórki w komórce i zmniejszenie poziomu wolnego od komórek wirusa z komórek nabłonka, jak również fibroblastów. Szybkie generowanie i selekcja mutantów RL13 i UL128L w fibroblastach. Aby wygenerować pracujące zapasy wirusów pochodzących z BAC w komórkach HFFF, komórki w kolbie o 25 cm2 transfekowano DNA BAC i okresowo badano aż do 100% infekcji. Wirus bez komórek przeniesiono do pojedynczej kolby o pojemności 150 cm2, a następnie do pięciu kolb o pojemności 150 cm2 i przygotowano zapasy wirusa (p3). Aby przetestować genetyczną integralność wirusa, zsekwencjonowano 10 klonów PCR każdego z RL13 i UL128L. Różnice w stosunku do oryginalnych sekwencji zostały wykluczone jako prawdopodobne błędy PCR, jeśli zostały wykryte w pojedynczych klonach. Analiza 13 zapasów wirusów (tabela 4), z których każda pochodzi niezależnie od DNA BAC, wykazała, że (a) gdy naprawiono tylko RL13, zmutował we wszystkich stadach (zapasy 1. 4); (b) gdy naprawiono tylko UL128, locus UL128 zmutowany w 2 z 3 zasobów pochodzących z HFFF (zapasy 5, 6), podczas gdy pozostał nienaruszony w stadach nabłonka (stany 8, 9, w jednym przypadku wykryto synonimiczne podstawienie) ; i (c) gdy oba RL13 i UL128 zostały naprawione, RL13 zmutowano w stnie (materiał wyjściowy 11), podczas gdy locus UL128 wydawał się pozostawać nietknięty. Gdy materiał wyjściowy (materiał wyjściowy 11) zawierający wirusa RL13 + UL128 +, który nosił przesunięcie ramki odczytu w RL13 w 20% genomów, był pasażowany czwarty raz, mutacja RL13 była następnie obserwowana w 100% klonów, wraz z delecją upośledzającą zarówno UL128 jak i UL130 w locus UL128. Tak więc zarówno RL13, jak i locus UL128 uległy remisji w fibroblastach, przy czym ten pierwszy miał tendencję do szybszej mutacji. Tabela 4 Mutacje RL13 i UL128L wykryte przez PCR w wirusach pochodzących z BAC w p3 RL13 kodują białko otoczki wirionu
[więcej w: zielony jęczmień gdzie kupić, zapalenie przyzębia, ziarnica złośliwa i chłoniaki nieziarnicze ]